Описанный недавно вирус SEN (SENV) содержит геном, представленный одноцепочечной кольцевой ДНК. Установлена высокая степень связи между двумя вариантами вируса (SENV-D и SENV-H) и посттрансфузионным гепатитом ни-А ни-Е. Для оценки влияния SENV-инфекции на хронический гепатит С (ХГС) и воздействия интерферона-альфа (IFN-альфа) на репликацию SENV проведено количественное определение ДНК SENV методом ПЦР в образцах сывороток от 186 пациентов с ХГС, из которых 39 (21%) человек оказались позитивными по ДНК SENV. У пациентов, позитивных и негативных по SENV, отсутствовали клинические, вирусологические и гистологические различия. Из 102 больных ХГС, получавших IFN- альфа, 18 были позитивны по ДНК SENV. Показатель устойчивого ответа на терапию IFN-альфа не отличался достоверно среди SENV -позитивных (28%) и SENV -негативных пациентов (39%). Уровни ДНК SENV снизились во время лечения у 15 из 16 пациентов, у 11 из 16 (69%) отмечено устойчивое исчезновение ДНК SENV при применении IFN-альфа. Среди коинфицированных пациентов ответ SENV на интерферонотерапию был более выражен при наличии РНК HCV, чем ее исчезновении (Р=0,013). Заключение: SENV-инфекция часто выявляется среди пациентов с ХГС, не оказывая выраженного влияния на его течение. SENV чувствителен к терапии IFN-альфа, у большинства пациентов развивается устойчивый вирусологический ответ.

Е-антиген в сыворотках крови лиц, инфицированных генотипом G вируса гепатита В.

В сыворотках крови четырех пациентов обнаружен вирус гепатита В генотипа G HBV (HBV/G) методом ПЦР с полугнездными (hemi-nested) праймерами, полученными путем вставки по нуклеотиду 36 в гене core, специфичной для этого генотипа. Несмотря на наличие двух стоп-кодонов в области precore, характерных для генотипа HBV/G, все пациенты были позитивны по HBeAg в сыворотке. От одного пациента были получены 10 клонов HBV, область precore и часть области core были просеквенированы, 6 клонов относились к HBV/G, 2 - к генотипу HBV/A, 2 оставшихся клона являлись рекомбинантами HBV/G и HBV/A. Наличие смешанной инфекции HBV/G и HBV/A и рекомбинации этих генотипов было показано также при секвенировании областей preS1 и preS2. Коинфекция HBV/G и HBV/A была отмечена и у трех других пациентов, рекомбинация этих генотипов - у двух. Десять клонов HBV были получены от одного пациента дважды с интервалом 1 год. Клоны HBV/A, HBV/G и их рекомбинанты находились в пропорции 9:1:0 когда пациенты были позитивны по HBeAg, после сероконверсии по анти-HBe соотношение генотипов составляло 0:8:2. Заключение: HBV/G часто выявляется в сочетании с HBV/A. Такая коинфекция может объяснять наличие HBeAg у лиц, инфицированных генотипом HBV/G. При сероконверсии по анти-HBe может происходить отбор HBV/G и рекомбинантов с HBV/А. Для подтверждения этих данных необходимы дальнейшие исследования.

Свидетельство в пользу возможности полового пути передачи вируса гепатита G.

Проведено перекрестное эпидемиологическое исследование среди 944 пациентов для оценки роли сексуальной активности и значения инфекций, передающихся половым путем (ИППП), в инфицировании HGV/GBV-C и другими вирусами гепатита. В группе лиц с ИППП распространенность HGV/GBV-C, HBV и HCV была значительно выше. Превалентность HGV/GBV-C среди пациентов с ИППП и без ИППП составляла 11,3% и 4,9% соответственно при выявлении методом ПЦР и 36,6% и 8,8% при сочетании ПЦР и ИФА. Сексуальная активность и наличие ИППП повышали риск передачи HGV/GBV-C.

Риск инфицирования вирусом гепатита С среди молодых наркоманов, пользующихся общими инъекционными приспособлениями.

Изучение передачи вируса гепатита С (HCV) при использовании общих инъекционных приспособлений (помимо шприцев) затруднено из-за высокого уровня HCV-инфекции у большинства наркоманов. Авторы определяли распространение HCV в большой когорте молодых наркоманов в Чикаго и выявляли риск инфицирования, связанный со специфическими формами общего использования инъекционных приспособлений. В 1997-1999гг. проведен скрининг на наличие анти-HCV среди 702 инъекционных наркоманов в возрасте 18-30 лет, частота выявления составляла 27%. У серонегативных лиц определяли анти-HCV в начале исследования, через 6 и 12 месяцев. В течение периода наблюдения, равного 290 человек/лет, у 29 человек отмечали сероконверсию (инцидентность: 10,0/100 человек/лет). Дополнительный относительный риск возникновения сероконверсии при учете демографической и наркологической ковариант был максимальным при использовании общих емкостей для приготовления наркотика (относительный риск 4.1; CI 95%: 1.4, 11.8), несколько ниже при использовании общих хлопковых фильтров (относительный риск 2,4; CI 95%: 1.1, 5.0). Риск, связанный с использованием общих шприцев и воды для промывки был повышенным, но незначительно. После учета в качестве дополнительного фактора общих шприцев, использование общих емкостей для приготовления наркотика оставалось самым четким указателем сероконверсии (относительный риск 3,5; CI 95%: 1.3, 9.9). Заключение: Использование общего инъекционного оборудования помимо шприцев может быть важной причиной распространения HCV среди инъекционных наркоманов.

Спру у пациентов с тяжелым заболеванием печени: диета без растительного белка может остановить поражение печени.

У пациентов со спру часто наблюдается умеренное поражение печени, которое обычно исчезает при диете без растительного белка. Проведено обследование четырех пациентов с тяжелым заболеванием печени, не получавших лечения от спру. Кроме того, наличие спру выявлено при скрининге сывороточного эндомизиального иммуноглобулина А и антител к тканевой трансглутаминазе у 185 взрослых, перенесших трансплантацию печени. Из 4-х пациентов с тяжелым поражением печени и спру у 1-го больного установлен врожденный фиброз печени, у 2-го - обширный стеатоз печени, и у двоих - прогрессирующий гепатит неясного происхождения. Трем пациентам была показана трансплантация печени, однако применение диеты без растительного белка привело к значительному улучшению функции печени. В группе больных, перенесших ранее трансплантацию печени, спру отмечена у 8 человек (4,3%). До операции 3 пациента имели первичный билиарный цирроз, 1 - аутоиммунный гепатит, 1 - первичный склерозирующий холангит и 1 - врожденный фиброз печени. Только один пациент длительное время придерживался диеты без растительного белка. Скрининг позволил выявить 2 случая спру: один - при аутоиммунном гепатите и один - при вторичном склерозирующем холангите. Заключение: Необходимо определять наличие спру у пациентов с тяжелым заболеванием печени. Диетотерапия может предотвратить прогрессирование поражения печени, даже в случаях, когда показана ее трансплантация.

Вирусные гепатиты и другие инфекционные заболевания среди бездомных лиц.

Целью работы являлось изучение распространения четырех основных инфекционных заболеваний - гепатита В, гепатита С, ВИЧ-инфекции и туберкулеза, а также частоты микст- инфекций и факторов риска для бездомных граждан. В ходе исследования проводили ретроспективный анализ заболеваемости и результатов лабораторных тестов у бездомных, помещавшихся в приют с мая 1995 по март 2000 гг. Из 829 участвовавших в исследовании бездомных лиц маркеры всех четырех инфекций выявлены у 597 человек. Превалентность анти-HCV, позитивного результата по пробе очищенного безбелкового туберкулина, анти-ВИЧ и HBsAg составила 41,7%, 20,6%, 1,84%, и 1,17% соответственно. Как минимум по одному из четырех маркеров были позитивны 52,6% лиц, более чем по одному маркеру - 12% обследованных. Коинфекцию HCV часто отмечали у лиц, позитивных по анти-ВИЧ (72,7%) и HBsAg (57,1%). Проводили оценку четырех основных факторов риска: внутривенное введение наркотиков, злоупотребление алкоголем, тюремное заключение, пребывание в приюте. Мультивариантный анализ показал, что независимыми факторами риска по HCV-инфекции являлись внутривенное употребление наркотиков и позитивность по анти-HBs, а фактором риска по анти-HВs - HCV-инфекция. Для старшего возраста была характерна позитивность по пробе очищенного безбелкового туберкулина. Заключение: Среди бездомных лиц распространены хронический гепатит С и микст-инфекции - пациенты с ВИЧ и HBV часто коинфицированы HCV. Наличие инфекций связано с определенными выявленными факторами риска.

Морфогенез HCV-подобных частиц.

Несмотря на то, что о геноме вируса гепатита С (HCV), впервые клонированном в 1989г., накоплено много информации, структура HCV и сборка частицы недостаточно изучена из-за отсутствия эффективной культуры HCV in vitro. Применяя рекомбинантный репликон вируса леса Семлики, экспрессирующий гены, кодирующие структурные белки HCV, впервые получили их сборку в HCV-подобные частицы в клетках млекопитающих. Данная экспериментальная система открывает новые возможности для изучения морфогенеза вируса и взаимодействий между вирусом и клетками хозяина.

Естественный межгенотипный рекомбинант вируса гепатита С, выявленный в Санкт-Петербурге.

Cчитается, что эволюция вируса гепатита С (HCV) осуществляется за счет мутаций шести генотипов вируса. В данной работе сообщается о жизнеспособном спонтанном рекомбинанте HCV и возможности рекомбинации играть роль в эволюции вируса. Ранее 149 изолятов HCV из Санкт-Петербурга были типированы с помощью секвенирования в области NS5B. В настоящем исследовании изучали последовательности области core у 41 из этих изолятов с целью определить совпадение результатов генотипирования HCV в этих двух участках генома. Установлено, что два филогенетически близких изолята HCV принадлежали к разным генотипам, 2k и 1b, соответственно, исходя из анализа последовательностей 5’-UTR-core и NS5B областей. Точка рекомбинации была установлена при секвенировании области E2-p7-NS2 в области NS2, предположительно между нуклеотидами 3175 и 3176 (по системе нумерации для изолята pj6CF). Определение последовательностей области 5’UTR-core для других четырех изолятов HCV, филогенетически близких двум вышеописанным (на основании анализа области NS5B), показало, что они также являются рекомбинантными. Поскольку нерекомбинантный изолят 2k был выявлен в Санкт-Петербурге и его распространение достаточно широко в городской популяции, рекомбинация могла произойти там в течение десяти лет. Обнаруженный рекомбинант предварительно назван RF1_2k/1b, согласно номенклатуре, применяемой для рекомбинантов ВИЧ. Необходимо учитывать рекомбинацию между генотипами HCV при классификации, лабораторной диагностике и лечении HCV-инфекции.

Персистентная и транзиторная репликация полноразмерных геномов вирусов гепатита С в культуре клеток.

Недостатком недавно созданных субгеномных репликонов вируса гепатита С (HCV) является отсутствие в них последовательностей, кодирующих структурные белки. В связи с этим не может быть получена информация о возможном влиянии этих белков на репликацию и патогенез, и о механизме формирования вирионов. Используя три адаптивные к клеточной культуре мутации, синергистично усиливающие репликацию РНК, разработали полноразмерные геномы HCV, амплифицируемые на высоком уровне в клеточной линии гепатомы человека Huh-7 и способные стабильно поддерживаться более 6 месяцев. Структурные белки хорошо экспрессировались, гликопротеины Е1 и Е2 образовывали гетеродимеры, стабильные при неденатурирующих условиях. Объединения гликопротеинов, связанные дисульфидными связями, не отмечали, что указывает на продуктивное соединение белков оболочки. Электронная микроскопия показала, что клеточные линии, несущие полноразмерные РНК HCV, содержат липидные вкрапления. Большая часть core-белка обнаружена на поверхности этих структур, тогда как гликопротеины локализованы в эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи. В подтверждение такого распределения не были обнаружены устойчивые к Н-эндогликозидазе формы этих белков. При изучении возможности продуцирования вирусных частиц было отмечено, что эти клетки выделяют значительные количества содержащих РНК HCV структур, устойчивых к нуклеазе и имеющих плавучую плотность в градиенте йодиксанола 1,04-1,1 г/мл. Подобные наблюдения были сделаны при изучении кратковременной репликации с применением аутентичного высокоадаптированного полноразмерного генома HCV, лишенного гетерологичных последовательностей. Однако наличие сопоставимого количества содержащих РНК структур в супернатанте клеток, несущих субгеномный репликон, свидетельствует о неспецифическом выделении, независимо от присутствия структурных белков. Полученные результаты позволяют предположить, что в Huh-7 отсутствуют клеточные факторы, необходимые для сборки и/или выделения вирусных частиц.

Рискованное поведение, связанное с переходом от неинъекционного к инъекционному употреблению наркотиков среди подростков и молодых наркоманов: исследование типа случай-контроль.

Целью данной работы было охарактеризовать лиц, склонных к переходу от неинъекционного к инъекционному употреблению наркотиков. Данная когорта, характеризуемая высокой степенью риска инфицирования через кровь, может быть отнесена к группе воздействия. Анализ соответствующих по возрасту групп “случай” и “контроль” был проведен при когортном исследовании в Балтиморе в 1997-1999гг. среди добровольно участвовавших инъекционных и неинъекционных наркоманов в возрасте 15-30 лет. К группе “случай” относили инъекционных наркоманов со стажем не более 2 лет, к группе сравнения - лиц соответствующего возраста, употребляющих кокаин, героин или крэк не внутривенно. В начале исследования все участники были опрошены о предшествующем погодовом поведении. Анализ с применением логистической регрессии основывался на информации о годе, предшествовавшем началу внутривенного употребления наркотиков (для группы “случай”), и таком же календарном отрезке для группы сравнения, а также на данных о поведении в настоящий момент. Из 270 неинъекционных наркоманов большинство были афроамериканцами (78%), женщинами (61%) и ВИЧ-позитивными лицами (7%) на начальном этапе анализа. Инъекционные наркоманы достоверно чаще, чем группа сравнения, были не-афроамериканцами, прекращали обучение в высшей школе, рано начинали половую жизнь и являлись жертвами насилия. Заключение: Учитывая, что лица, недавно начавшие внутривенное употребление наркотиков, характеризуются высоким риском приобретения ВИЧ и гепатита, и к ним трудно применить превентивные меры, полученные данные могут позволить выявлять среди неинъекционных наркоманов категории лиц, готовых перейти к внутривенному употреблению препаратов.

Сравнение эффективности, безопасности и иммуногенности рекомбинантных вакцин против гепатита В Hepavax-Gene и Engerix-B среди новорожденных во Вьетнаме, рожденных от матерей, позитивных по HBsAg и HBeAg: 2-х летнее наблюдение.

В ходе рандомизированного контролируемого исследования 105 здоровым доношенным новорожденным, родившимся от HBsAg- и HBeAg-позитивных матерей, вводили 3 дозы (в месяцы 0, 1 и 6) новой рекомбинантной вакцины Hepavax-Gene или Engerix-B. Обе группы получали также гепатит В-специфический Hepa-big иммуноглобулин в течение 24 часов после рождения. Уровни анти-HBs определяли на 30, 60, 210, 360 дней и 2 года после вакцинации. По эффективности, безопасности и иммуногенности обе вакцины достоверно не отличались, вызывая >94% серологической защиты в течение 360 дней. Через 2 года только один ребенок (1,9%) из группы Hepavax-Gene и два (3,9%) из группы Engerix-B были позитивны по HBsAg. Ни в одной группе не отмечали серьезных побочных эффектов.

Несколько вопросов относительно вакцины против гепатита В.

Изучено несколько вопросов относительно вакцины против гепатита В, требующих более тщательного изучения: способ введения (подкожно или внутримышечно), количество антигена, необходимость адьюванта, антигенная и молекулярная структура HBsAg. По мнению автора, важно достичь высокого уровня сероконверсии, но не высоких титров антител (протективный иммунитет не зависит от титров антител). Могут применяться и изучаться в дальнейшем два способа введения вакцин. Почему бы не использовать для иммунизации здоровых взрослых и детей вакцины с низким содержанием HBsAg (1,5-2,5 мг/г), возможно, без адьюванта, вводимые подкожно? Дозы вакцины 20мг/г могут использоваться внутримышечно только для лиц, не ответивших или ответивших слабо на иммунизацию, или для групп риска.

Конкурентная обратная транскрипция-ПЦР в сочетании с хемилюминесцентной гибридизацией для выявления и количественного определения РНК HCV.

Метод конкурентной обратной транскрипции-ПЦР (RT-cPCR) в сочетании с хемилюминесцентной гибридизацией был разработан для выявления и количественной оценки РНК HCV. Концентрацию РНК HCV определяли с помощью кривой внешнего стандарта, полученной в результате совместной амплификации внутреннего конкурента и последовательностей- мишеней в серии разведений. Предел чувствительности хемилюминесцентной RT-cPCR составлял 100 копий/мл (94 МЕ/мл), предел количественного определения - от 850 копий/мл 9795 МЕ/мл до 4,95х10(7) копий/мл. Данный метод был применен для оценки уровней циркулирующей РНК HCV у 26 анти-HCV-позитивных пациентов в сравнении с методами разветвленных цепей ДНК (bDNA) и гнездной RT-PCR. У 18 пациентов уровни РНК HCV превышали предел количественного определения методом хемилюминесцентной RT-cPCR, но только 11 пациентов были позитивны в количественном тесте bDNA. Между результатами количественного определения методами хемилюминесцентной RT-cPCR и bDNA была установлена значимая корреляция (R(2)=0,8391). Из 8 пациентов, титры РНК HCV у которых находились ниже предела количественного определения, четверо были позитивны при использовании хемилюминесцентной RT-cPCR, что совпадало с результатами, полученными в гнездной RT-PCR. Четкая линейная зависимость была установлена для генотипов HCV 1a, 2a, 2b в трехкратно разведенных образцах сывороток. Заключение Предложенный метод хемилюминесцентной RT-cPCR позволяет количественно определять РНК HCV так же точно, как и методом bDNA, и с такой же чувствительностью, как и методом гнездной RT-PCR.

Клинические и патологические характеристики орального плоского лишая у HCV-позитивных и HCV-негативных пациентов.

Распространение анти-HCV у пациентов с оральным плоским лишаем варьирует в разных географических зонах от 0 до 65%. Некоторые характерные клинические проявления были установлены при оральном плоском лишае, ассоциированном с HCV-инфекцией. Целью данного исследования было определить клинические особенности, а также различия по интенсивности субэпителиального воспалительного инфильтрата среди HCV-позитивных и HCV-негативных пациентов с оральным плоским лишаем. В исследовании участвовали 62 пациента, средний возраст 63,5+/-14,49 лет, мужчины - 48,4%, женщины - 51,6%. Больные были разделены на группы, исходя из позитивности по анти-HCV. У каждого пациента отмечали возраст, пол, клинические проявления (ретикулярные или атрофически-эррозивные), размер поражений, их расположение и число, интенсивность воспалительного инфильтрата и колонизацию Candida albicans. Ретикулярный плоский лишай являлся наиболее частым клиническим проявлением как среди HCV-позитивных (57,1%), так и среди HCV-негативных (63,6%) лиц. Колонизация С.аlbicans варьировала от 42,8% у HCV-позитивных до 41,7% у HCV-негативных пациентов. У HCV-позитивных пациентов чаще, чем у HCV-негативных, наблюдали следующие места локализации в ротовой полости: слизистая губ (28,6% против 7,3%), язык (57,1% против 29,1%), десны (71,4% против 23,6%) соответственно. Число очагов поражения в полости рта было выше у HCV-позитивных (71,4%), чем среди HCV-негативных (20,4%) пациентов. Показатели плотности субэпителиального воспалительного инфильтрата между группами достоверно не различались. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости осмотра печени у всех пациентов с оральным плоским лишаем, особенно тех, у кого множественные очаги поражения расположены на деснах.